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Nov 01, 2023

Activation du HIF

Volume de mort cellulaire et de maladie

Cell Death & Disease volume 14, Article number: 339 (2023) Citer cet article

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Le facteur de transcription hypoxia-inducible factor-1α (HIF-1α), en tant que régulateur principal des réponses adaptatives à l'hypoxie, possède deux domaines d'activation de la transcription [TAD, N-terminal (NTAD) et C-terminal (CTAD)]. Bien que les rôles de HIF-1α NTAD dans les maladies rénales aient été reconnus, les effets exacts de HIF-1α CTAD dans les maladies rénales sont mal compris. Ici, deux modèles de souris indépendants de lésions rénales induites par l'hypoxie ont été établis à l'aide de souris HIF-1α CTAD knock-out (HIF-1α CTAD−/−). De plus, l'hexokinase 2 (HK2) et la voie de la mitophagie sont modulées à l'aide de méthodes génétiques et pharmacologiques, respectivement. Nous avons démontré que HIF-1α CTAD−/− aggravait les lésions rénales dans deux modèles murins indépendants de lésions rénales induites par l'hypoxie, y compris les lésions rénales induites par l'ischémie/reperfusion et la néphropathie unilatérale induite par l'obstruction urétérale. Mécaniquement, nous avons constaté que HIF-1α CTAD pouvait réguler transcriptionnellement HK2 et par la suite améliorer les lésions tubulaires induites par l'hypoxie. En outre, il a été constaté que le déficit en HK2 contribuait à une lésion rénale grave par inhibition de la mitophagie, tandis que l'activation de la mitophagie à l'aide d'urolithine A pouvait protéger de manière significative contre les lésions rénales induites par l'hypoxie chez les souris HIF-1α C-TAD−/−. Nos résultats suggèrent que la voie HIF-1α CTAD-HK2 représente un nouveau mécanisme de réponse rénale à l'hypoxie, qui fournit une stratégie thérapeutique prometteuse pour les lésions rénales induites par l'hypoxie.

L'hypoxie, l'une des conditions physiopathologiques les plus répandues, est un instigateur crucial d'une variété de maladies rénales [1, 2]. Bien que des preuves convaincantes aient indiqué que la sévérité et la durée de l'hypoxie déterminent le pronostic rénal [2, 3], les réponses moléculaires exactes du rein à l'hypoxie restent largement énigmatiques.

Il est bien connu que le facteur de transcription hypoxia-inducible factor-1 (HIF-1) est essentiel pour les adaptations cellulaires à l'hypoxie [4], qui est étroitement régulée par des modifications post-traductionnelles par au moins deux mécanismes distincts dépendant de l'oxygène : l'hydroxylation des résidus proline par le domaine prolyl hydroxylase (PHD) et l'hydroxylation de l'asparagine par l'inhibition du facteur HIF-1 (FIH-1) [5]. Des études de biologie structurale ont révélé que HIF-1, en tant que facteur maître de transcription, possède deux domaines d'activation transcriptionnelle [TAD ; N-terminal (NTAD) et C-terminal (CTAD)], qui sont respectivement régulés par PHD et FIH-1 [6]. De plus, des études convaincantes ont démontré que NTAD et CTAD pouvaient transcrire des gènes distincts, remplissant leur propre fonction [6, 7]. Bien que les rôles de HIF-1 aient été étudiés dans un certain nombre de maladies rénales, comme en témoigne la modulation génétique et pharmacologique, les fonctions distinctes du CTAD et du NTAD dans les maladies rénales hypoxiques restent obscures.

Actuellement, les personnes souffrant d'anémie rénale ont été traitées avec un inhibiteur spécifique de la PHD, qui stimule la fonction de HIF-1α NTAD [8]. Fait intéressant, des études précliniques ont démontré que l'activation de HIF-1α NTAD induite par l'inhibiteur de PHD protège contre les lésions rénales aiguës (IRA) et les maladies rénales chroniques. Par exemple, Wu et al. [9] ont démontré que l'activation du HIF-1α NTAD protège les reins de l'ischémie/hypoxie. Pendant ce temps, il a été confirmé que l'activation de HIF-1 NTAD a des effets rénoprotecteurs sur la néphropathie diabétique [10]. Ces données suggèrent fortement que HIF-1α NTAD pourrait avoir un effet protecteur contre les maladies rénales. Cependant, le rôle précis de HIF-1α CTAD dans les maladies rénales hypoxiques n'est pas bien compris.

Ici, nous avons établi les souris knock-out HIF-1α CTAD (HIF-1α CTAD−/−) pour évaluer la fonction physiopathologique potentielle de HIF-1α CTAD dans l'insuffisance rénale hypoxique. Fait intéressant, nous avons démontré que HIF-1α CTAD protège contre les lésions rénales induites par l'hypoxie par la mitophagie médiée par l'hexokinase 2 (HK2). Nos résultats représentent une nouvelle perspective sur la signalisation de la réponse hypoxique dans le rein, qui fournit une stratégie thérapeutique prometteuse pour les lésions rénales hypoxiques.

Toutes les expérimentations animales ont été réalisées conformément aux directives standard pour le soin et l'utilisation des animaux de laboratoire et ont été approuvées par le comité d'éthique de l'Université du Sud-Est. Des souris HIF-1α CTAD−/− ont été générées à l'aide d'une approche basée sur CRISPR/Cas9. Le gène HIF-1α a été édité par recombinaison homologue. En bref, l'ARNm et l'ARNg de Cas9 sont obtenus par transcription in vitro. Le vecteur de recombinaison homologue (vecteur donneur) a été construit en utilisant le clonage In-Fusion, qui contient un bras homologue en 5' de 3,0 kb et un bras homologue en 3' de 3,0 kb. Ensuite, l'ARNm Cas9, l'ARNg et le vecteur donneur ont été microinjectés dans les œufs fécondés de souris C57BL/6J pour obtenir des souris de génération F0. Enfin, les souris de génération F0, qui ont été identifiées par amplification et séquençage par réaction en chaîne par polymérase (PCR), ont été accouplées avec des souris C57BL/6J normales pour obtenir les souris de génération F1. En croisant des lignées parentales hétérozygotes, des compagnons de portée homozygotes et de type sauvage (WT) ont été obtenus. Des souris mâles (âgées de 6 à 8 semaines, pesant de 20 à 22 g) ont été utilisées pour des expériences, et les modèles murins de lésion d'ischémie/reperfusion rénale (I/R) et de néphropathie d'obstruction urétérale unilatérale (UUO) ont été établis comme précédemment rapporté [11 , 12]. Pour la lésion I/R bilatérale, les deux pédicules rénaux ont été clampés à l'aide de pinces pour microanévrisme pendant 35 min. Les opérations fictives ont subi les mêmes gestes chirurgicaux sans clampage des pédicules rénaux. La température corporelle a été contrôlée entre 36,5 °C et 37,0 °C à l'aide d'une sonde rectale sensible tout au long de la procédure. Pour UUO, l'uretère gauche de la souris a été ligaturé juste en dessous du bassinet rénal. Les souris Sham ont subi des procédures chirurgicales identiques, sauf que l'uretère n'a pas été ligaturé. Les souris ont été euthanasiées le jour 1 après une blessure I/R ou le jour 3 après UUO sous anesthésie générale, et leurs reins ont été récoltés.

Avant d'établir le modèle de lésion I/R, les souris ont été soumises à une administration orale quotidienne d'urolithine A (MedChemExpress, Monmouth Junction, NJ, USA) à une dose de 50 mg/kg de poids corporel pendant deux jours consécutifs pour induire la mitophagie. Pour le transfert de gènes lentiviraux, des lentivirus exprimant HK2 (Lv-HK2) ou un contrôle négatif (Lv-NC) ont été obtenus auprès de GenePharma (Shanghai, Chine). Au jour 3, avant la chirurgie I / R ou UUO, le transfert de gène médié par Lv dans les reins de souris I / RI a été effectué par injection dans la veine caudale (5 × 108 TU / souris). Les souris ont été euthanasiées au jour 1 après I/RI ou au jour 3 après le clampage des pédicules rénaux. Par la suite, le sérum et les tissus rénaux ont été récoltés.

Nous avons caractérisé les profils d'expression des gènes d'ARNm dans le cortex rénal suite à une lésion I/R à l'aide du séquençage de l'ARN. Les analyses de voie basées sur les bases de données Gene Ontology (GO) et Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG; https://www.genome.jp/kegg/kegg1.html) ont été utilisées pour prédire la fonction des gènes exprimés de manière différentielle.

Les reins ont été prélevés sur des souris âgées de 6 semaines et leurs cellules épithéliales tubulaires (CET) ont été isolées pour une culture primaire en utilisant des méthodes établies [13]. Les CET ont été cultivés dans une atmosphère humidifiée de 5% CO2 et 95% O2 à 37°C. Afin d'induire une lésion hypoxique, les cellules ont été cultivées pendant 12 h dans des conditions hypoxiques (1 % O2, 94 % N2 et 5 % CO2) dans le milieu sans glucose. Après un traitement hypoxique, les cellules ont été remises dans un milieu de culture régulier avec de l'oxygène pendant 2 h pour se réoxygéner (hypoxie/réoxygénation, H/R). Les cellules témoins ont été incubées avec un milieu ordinaire dans un incubateur ordinaire (5 % de CO2 et 21 % d'O2). Pour la transfection adénovirale (Ad), les cellules cultivées à 70 % de confluence ont été transduites avec Ad-NC ou Ad-CTAD contenant le domaine bHLH-PAS pendant 24 h selon les instructions du fabricant, puis exposées à des conditions H/R pendant 24 h. Ad-NC a été utilisé comme contrôle négatif.

Le test d'immunoprécipitation de la chromatine (ChIP) a été réalisé à l'aide du kit Simple ChIP Plus Enzymatic Chromatin IP (Magnetic Beads, #9003, Cell Signaling Technology) conformément aux descriptions précédentes [12]. IP a été réalisée en utilisant un anticorps contre HIF-1α (ab2185, Abcam) ou IgG comme contrôle négatif. La PCR avec des amorces spécifiques de la région promotrice de HK2 a été utilisée pour détecter les fragments d'ADN précipités.

Les plasmides, tels que le plasmide rapporteur de la luciférase pGL3-HRE-HK2-Luc, HIF-1α (HIF-1α TAD, contenant NTAD et CTAD), HIF-1α NTAD et HIF-1α CTAD dans le vecteur pSD11 ont été construits par GenePharma ( Shangai, Chine). HIF-1α NTAD-Gal4 et HIF-1α CTAD-Gal4 ont été construits en insérant les séquences du plasmide Addgene #18955 dans le squelette du plasmide Addgene #24887 comme décrit précédemment [14]. Les plasmides correspondants ont été transfectés dans des cellules cibles à l'aide de Lipofectamine 3000 conformément aux instructions du fabricant (Invitrogen Corp., Carlsbad, CA, USA). Des méthodes détaillées pour le dosage du rapporteur de la luciférase ont été établies, comme indiqué précédemment [12].

Le cortex rénal a été immergé dans un fixateur contenant 2,5 % de glutaraldéhyde et 4 % de paraformaldéhyde. La manipulation et la détection des échantillons ont été effectuées par le laboratoire central de microscopie électronique de l'Université du Sud-Est (H-7650, Hitachi, Japon). La mitophagie dans les CET a été quantifiée.

Les mitochondries ont été isolées à l'aide du kit d'isolement mitochondrial (BioVision, Inc. CA, USA) selon le protocole du fabricant. En bref, après lavage avec du PBS glacé, les cellules ont été centrifugées à 600 g pendant 5 min et remises en suspension dans du tampon d'extraction de cytosol 1 ×. Ensuite, l'homogénéisation a été centrifugée à 1200 g pendant 10 min à 4 ° C pour éliminer les noyaux et les cellules intactes. Le surnageant collecté a été centrifugé à 10 000 g pendant 30 min à 4 °C. Enfin, les culots ont été remis en suspension dans du tampon d'extraction de cytosol 1 × et centrifugés à 10 000 g pendant 30 min à 4 ° C pour obtenir des mitochondries.

L'ARN total a été extrait à l'aide de TRIzol (Takara, Japon), puis l'ADNc a été synthétisé à l'aide d'un kit de réactifs PrimeScript RT (Takara) conformément aux instructions du fabricant. En utilisant un système de PCR en temps réel ABI PRISM 7300 (Applied Biosystems, USA), une PCR en temps réel (RT-PCR) a été réalisée. L'expression relative de l'ARNm a été normalisée à la β-actine. Toutes les amorces pour RT-PCR sont répertoriées dans le tableau supplémentaire 1.

Pour la coloration immunohistochimique, après récupération d'antigène à l'aide du tampon de récupération d'antigène EDTA à pH 9,0 et chauffage pendant 15 min à 100 ° C, les coupes de tissu de rein fixées au formol et incluses en paraffine ont été incubées avec des anticorps primaires contre la lésion rénale moléculaire-1 ( KIM-1, MA5–28211, Invitrogen), F4/80 (ab6640, Abcam, Cambridge, MA), HK2 (ab209847, Abcam), PTEN-induced putative kinase 1 (PINK1, ab23707, Abcam), Bcl-2 19- kDa interagissant avec la protéine 3 (BNIP3, ab109362, Abcam) ou la sous-unité I du cytochrome C oxydase (ab14705, Abcam), puis analysée à l'aide d'un système de détection de streptavidine peroxydase (Maixin Biotech, Fuzhou, Chine) conformément au protocole du fabricant. La diaminobenzidine (Maixin) a été utilisée comme substrat spécifique de la peroxydase de raifort (HRP).

Pour l'analyse par immunoblot, le cortex rénal, les CET primaires ou les mitochondries ont été préparés comme décrit précédemment [11]. Anti-HIF-1α (ab1, Abcam), anti-HIF-1α-C-terminal (ab228649, Abcam), anti-LC3 (ab192890, Abcam), anti-p62 (ab109012, Abcam), anti-HK2 (ab209847, Abcam), PINK1 (ab23707, Abcam), BNIP3 (ab109362, Abcam), anti-COX IV (ab16056, Abcam) et anti-β-actine (AY0573, Abways, Chine) ont été utilisés comme anticorps primaires. Des anticorps anti-immunoglobuline G (IgG) de lapin ou anti-IgG de souris (Abcam) conjugués à la peroxydase de raifort ont été utilisés comme anticorps secondaires. Un réactif ECL Plus a été utilisé pour détecter les signaux (Thermo Fisher Scientific). Les valeurs d'intensité exprimées comme l'expression relative de la protéine ont été normalisées à la β-actine ou à la COX IV.

Les données sont présentées sous forme de moyenne ± SEM. Les données ont été analysées à l'aide d'un test t de Student ou d'un test Mann-Whitney U par SPSS version 20.0 (IBM Corp., Armonk, NY, USA). Une valeur de p bilatérale <0,05 était considérée comme significative.

Des souris HIF-1α C-TAD − / − ont été générées pour explorer la fonction physiopathologique de HIF-1α CTAD (Fig. 1a), et une illustration schématique de l'inactivation de HIF-1α CTAD est fournie à la Fig. 1b. De plus, un anticorps spécifique anti-HIF-1α CTAD a été utilisé pour corroborer les résultats de l'inactivation de HIF-1α CTAD (Fig. S1 supplémentaire). Nous avons remarqué que les taux de créatinine sérique (SCr) et d'azote uréique sanguin (BUN) étaient significativement augmentés chez les souris HIF-1α CTAD−/− (Fig. 1c). Dans le rein de souris HIF-1α CTAD - / -, l'expression de KIM-1, un marqueur de lésion des tubules, a également été augmentée (Fig. 1d, e). Pendant ce temps, comme illustré sur la figure 1f, une lésion rénale bilatérale dans le groupe WT a entraîné une augmentation de la nécrose et du détachement des tubules, une accumulation de débris cellulaires et la formation de cylindres ; alors que ces paramètres de lésion étaient significativement aggravés dans le groupe HIF-1α CTAD−/−. De plus, les expressions d'ARNm du facteur de nécrose tumorale-α (TNF-α), de l'interleukine-1β (IL-1β) et de la protéine chimiotactique des monocytes-1 (MCP-1) étaient régulées positivement chez ces souris (Fig. 1g). De manière concomitante, une infiltration plus importante de macrophages a été observée dans les reins lésés de souris HIF-1α CTAD − / − (Fig. 1h). Ces données ont démontré que l'inactivation de HIF-1α CTAD aggrave les lésions rénales dans l'IRA ischémique.

a Stratégie de construction pour la souris HIF-1α CTAD−/−. b Représentation schématique du HIF-1α CTAD KO proposé. c Niveaux de SCr et BUN au jour 1 après 35 min de lésion rénale induite par l'ischémie/la reperfusion (I/RI) (n = 6). d Analyse quantitative par réaction en chaîne par polymérase en temps réel (qRT-PCR) de l'expression de KIM-1. Les niveaux relatifs ont été normalisés à la β-actine (n = 6). e Images représentatives de la coloration KIM-1 (n = 6). Barres d'échelle, 50 µm. f Changements histologiques représentatifs (coloration périodique à l'acide de Schiff [PAS]) le jour 1 après 35 min d'I/RI (à gauche, n = 6). Barre d'échelle, 100 µm. La quantification des lésions tubulaires basée sur la coloration PAS (à droite, n = 6). g Expression de l'ARNm de facteurs inflammatoires (monocyte chemoattractant protein-1 [MCP-1], tumor necrosis factor-α [TNF-α] et interleukine-1β [IL-1β]) dans le rein lésé I/R évalué par qRT- PCR. Les niveaux relatifs ont été normalisés à la β-actine (n = 6). h. Coupes de rein représentatives F4/80 colorées de souris blessées I/R (à gauche). Barres d'échelle, 50 µm. La population semi-quantitative de macrophages F4/80+ infiltrant le rein lésé I/R (à droite). Les données sont présentées sous forme de moyenne ± SEM de 6 souris. ** valeur p < 0,01 par rapport aux souris WT (test t).

La fonction physiopathologique de HIF-1α CTAD a été évaluée plus en détail dans UUO, un modèle de lésion rénale hypoxique non réversible. Semblable au modèle I / RI, nous avons observé que l'expression de KIM-1 était significativement augmentée dans les lésions rénales induites par UUO chez les souris HIF-1α CTAD − / − (Fig. 2a, b). Histologiquement, une nécrose sévère et un décollement des tubules, une accumulation de débris cellulaires et la formation de cylindres ont été observés dans les reins HIF-1α CTAD − / − avec UUO (Fig. 2c). Pendant ce temps, l'expression d'ARNm de cytokines inflammatoires (ARNm de MCP-1, TNF-α et IL-1β) a été significativement augmentée dans les reins obstrués de souris HIF-1α CTAD - / - (Fig. 2d). En parallèle, une augmentation significative de l'accumulation de macrophages a également été observée dans ce groupe (Fig. 2e). Ces résultats ont ainsi démontré que l'inactivation de HIF-1α CTAD améliore les lésions rénales dans les modèles de rein hypoxique.

une analyse qRT-PCR de l'expression de KIM-1. Les niveaux relatifs ont été normalisés à la β-actine (n = 6). b Des images représentatives de l'expression de KIM-1 dans les tissus rénaux de souris UUO ont été évaluées par immunohistochimie (n = 6). Barres d'échelle, 50 µm. c Changements histologiques (coloration PAS) au jour 3 après UUO (à gauche, n = 6). Barre d'échelle, 100 µm. La quantification des lésions tubulaires basée sur la coloration PAS (à droite, n = 6). d Expression de l'ARNm des facteurs inflammatoires (MCP-1, TNF-α et IL-1β) dans le rein UUO évaluée par qRT-PCR. Les niveaux relatifs ont été normalisés à la β-actine (n = 6). e Coupes de rein colorées F4/80 représentatives de souris UUO (à gauche). Barres d'échelle, 50 µm. La population semi-quantitative de macrophages F4/80+ infiltrant le rein UUO (à droite). Les données sont présentées sous forme de moyenne ± SEM de 6 souris. ** valeur p < 0,01 par rapport aux souris WT (test t).

Pour étudier les mécanismes exacts des effets néfastes potentiels induits par l'inactivation de HIF-1α CTAD, une analyse de l'expression génique à l'échelle du génome a été réalisée (Fig. 3a). Les gènes régulés à la hausse et à la baisse affichés par parcelle de volcan (Fig. 3b). Pour identifier les caractéristiques inhérentes du transcriptome et prédire la fonction des gènes exprimés de manière différentielle, nous avons appliqué les analyses GO (Fig. 3c) et KEGG (Fig. 3d) pour la sélection des caractéristiques. Fait intéressant, les gènes exprimés de manière différentielle se sont avérés associés à la signalisation, au métabolisme et à la réplication de l'ADN de MAPK. Considérant la fonction transcriptionnelle de HIF-1, nous nous sommes concentrés sur les gènes différentiellement exprimés qui étaient spécifiquement régulés à la baisse.

un regroupement hiérarchique montre un profil d'expression d'ARNm distinct entre les reins HIF-1α CTAD KO et WT avec I / RI. Les nuances rouges et vertes indiquent l'expression au-dessus et au-dessous de l'expression relative, respectivement, dans tous les échantillons. b Volcano plot montrant des gènes différentiellement exprimés. Les gènes régulés à la hausse (rouge) et les gènes régulés à la baisse (vert) avec un pli <0,6 et avec p <0,05. c L'analyse de catégorie d'ontologie de gène des gènes différentiellement exprimés. d L'analyse de l'enrichissement de la voie des gènes exprimés de manière différentielle. e, f Expression de l'ARNm de HK2 dans le rein avec I/RI (e) ou UUO (f) détectée par qRT-PCR. Les niveaux relatifs ont été normalisés à la β-actine (n = 6). g, h Analyse Western blot de l'expression de HK2 dans le rein avec I/RI (g) ou UUO (h) (n = 6). i, j Analyse immunohistochimique de l'expression de HK2 dans le rein avec I/RI (i) ou UUO (j) (n = 6). Barres d'échelle, 50 µm pour I/RI ; 100 µm pour UUO. Les données sont présentées sous forme de moyenne ± SEM de 6 souris. ** valeur p < 0,01 par rapport aux souris WT (test t).

Curieusement, nous avons constaté que l'expression de HK2, une enzyme essentielle limitant le taux de glycolyse, semblait être significativement régulée à la baisse chez les souris HIF-1α CTAD−/− (Fig. 3a). Par conséquent, les résultats de l'analyse de séquençage à l'échelle du génome ont été validés à la fois in vivo et in vitro. Nous avons constaté que l'expression de HK2 au niveau transcriptionnel était significativement diminuée dans les reins des souris HIF-1α CTAD−/− avec I/R (Fig. 3e) et UUO (Fig. 3f). Pendant ce temps, son expression protéique a également été confirmée par Western blot (Fig. 3g, h). De plus, l'analyse immunohistochimique a révélé que HK2 était principalement exprimé dans les tubules, cependant, l'expression de HK2 était considérablement diminuée chez les souris HIF-1α CTAD - / - avec I / R (Fig. 3i) et UUO (Fig. 3j). Ces données ont indiqué que HK2 est impliqué dans les effets rénoprotecteurs médiés par HIF-1α CTAD.

Considérant que HK2 était principalement exprimé dans les tubules, nous avons ensuite exploré son mécanisme de régulation et sa fonction dans les TEC. Nous avons observé que l'expression de l'ARNm de HK2 (Fig. 4a) et de la protéine (Fig. 4b et Fig. S2a supplémentaire) était significativement réduite dans les TEC traités par hypoxie de souris HIF-1α CTAD − / −. Pendant ce temps, une augmentation marquée de l'expression de KIM-1 (un marqueur sensible et spécifique de la lésion des tubules) a également été observée (Fig. 4c). Plus intrigant, nous avons découvert que la surexpression de HIF-1α CTAD induisait de manière significative l'expression de l'ARNm de HK2 (Fig. 4d) et de la protéine (Fig. 4e et Fig. S2b supplémentaire) dans les TEC. Comme prévu, KIM-1 a diminué de manière significative (Fig. 4f). De manière concomitante, une diminution de l'expression des ARNm de cytokines inflammatoires (ARNm de MCP-1, TNF-α et IL-1β) a été observée dans ce groupe (Fig. 4g). Ces résultats suggèrent que l'inhibition de HK2 induite par le knock-out de HIF-1α CTAD pourrait être un mécanisme important pour les lésions tubulaires graves.

a, c Analyse qRT-PCR de l'expression de HK2 et KIM-1 dans les cellules tubulaires avec H/R. Le niveau relatif a été normalisé à la β-actine (n = 4). b Analyse Western blot de l'expression de HK2 dans les cellules tubulaires avec H/R (n = 4). d, f L'expression de l'ARNm de HK2 et de KIM-1 a été analysée dans les TEC primaires avec H/R avant que HIF-1α CTAD ne soit surexprimé avec un adénovirus (Ad-CTAD). Le niveau relatif a été normalisé à la β-actine (n = 4). e Analyse par Western blot de l'expression de HK2 dans les TEC primaires avec H/R avant que HIF-1α CTAD ne soit surexprimé avec un adénovirus (Ad-CTAD) (n = 4). g Expression de l'ARNm de facteurs inflammatoires (MCP-1, TNF-α et IL-1β) dans les CET primaires avec H / R après que HIF-1α CTAD a été surexprimé avec un adénovirus (Ad-CTAD). Les niveaux relatifs ont été normalisés à la β-actine (n = 4). h Les résultats du dosage de la luciférase corrigés pour l'efficacité de la transfection à l'aide de la β-galactosidase sont présentés comme une moyenne de 4 expériences distinctes ± SEM. i Le test ChIP montre la liaison de HIF-1 au promoteur HK2 (n = 4). j L'expression de l'ARNm de KIM-1 a été analysée dans les TEC primaires avec H/R après que HK2 ait été surexprimé avec l'adénovirus (Ad-HK2). Le niveau relatif a été normalisé à la β-actine (n = 4). k L'expression de l'ARNm des facteurs inflammatoires (MCP-1, TNF-α et IL-1β) dans les CET primaires avec H/R après que HK2 a été surexprimée avec l'adénovirus (Ad-HK2). Les niveaux relatifs ont été normalisés à la β-actine (n = 4). **valeur de p < 0,01 par rapport au groupe NC (test t ou test U de Mann-Whitney).

Par la suite, le mécanisme sous-jacent de HK2 régulé à la baisse induit par l'inactivation de HIF-1α CTAD a été étudié. L'analyse in silico a été utilisée pour déterminer si HK2 était directement stimulée par le HIF-1. Fait intéressant, l'existence d'un motif de liaison putatif à HIF-1 (5′-RCGTG-3′) situé dans la région promotrice du locus HK2 a été trouvée (fichier supplémentaire 1), indiquant que HK2 pourrait être régulé transcriptionnellement par HIF-1α. Selon le test du rapporteur de la luciférase, HIF-1α CTAD a induit de manière significative l'activité de HK2 par rapport aux témoins (Fig. 4h), indiquant une régulation transcriptionnelle de HK2 par HIF-1α CTAD. Pour établir la présence de HIF-1α CTAD dans la région promotrice de HK2 in vivo, des tests ChIP ont été effectués. Comme prévu, nous avons constaté que la liaison HIF-1α CTAD pouvait être enrichie sur ce promoteur dans les reins des souris WT mais pas dans les reins des souris HIF-1α CTAD−/− (Fig. 4i), confirmant l'interaction directe entre HIF- 1α et HK2 en réponse à une lésion hypoxique.

Par la suite, la fonction potentielle de HK2 dans les TEC hypoxiques a également été déterminée. Le HK2 a été surexprimé à l'aide de vecteurs adénoviraux. Fait intéressant, la diminution significative de l'expression de l'ARNm de KIM-1 (Fig. 4j) et de la protéine (Fig. S3 supplémentaire) a été observée. De manière concomitante, l'expression des ARNm de cytokines inflammatoires (ARNm de MCP-1, TNF-α et IL-1β) était également significativement atténuée lorsque HK2 était surexprimé (Fig. 4k). Pris ensemble, la voie HIF-1α CTAD-HK2 joue un rôle crucial dans la protection contre les lésions tubulaires induites par l'hypoxie.

Pour comprendre le rôle de HK2 dans les lésions rénales induites par l'I/R dans les conditions d'inactivation de HIF-1α C-TAD, la surexpression de HK2 chez des souris HIF-1α C-TAD−/− avec I/RI a été réalisée à l'aide de Lv-HK2 injection. De manière frappante, nous avons constaté que les souris ayant reçu l'injection de Lv-HK2 présentaient des taux de SCr et de BUN considérablement réduits (Fig. 5a). L'expression de KIM-1 a été réduite dans les reins de ce groupe (Figs. 5b et 5c). Pendant ce temps, la coloration périodique à l'acide Schiff (PAS) a également démontré une amélioration des lésions rénales (Fig. 5d). De plus, la surexpression de HK2 a réduit l'expression des ARNm de MCP-1, TNF-α et IL-1β dans les tissus corticaux rénaux, comme indiqué par Western blot (Fig. 5e). De plus, comme illustré sur la figure 5f, il y a eu une diminution notable du nombre d'infiltrations de macrophages. Ces données ont clairement révélé que la surexpression de HK2 pouvait protéger contre les lésions rénales induites par l'I/R dans des conditions d'inactivation de HIF-1α CTAD.

un niveau de Scr et BUN chez des souris HIF-1α CTAD−/− soumises à 35 min d'I/RI suite à l'administration de Lv-HK2 (n = 6). b Analyse qRT-PCR de l'expression de KIM-1 chez des souris HIF-1α CTAD−/− soumises à 35 min d'I/RI après l'administration de Lv-HK2. Les niveaux relatifs ont été normalisés à la β-actine (n = 6). c Des images représentatives de l'expression de KIM-1 dans les tissus rénaux ont été évaluées par immunohistochimie (n = 6). Barres d'échelle, 50 µm. d Modifications histologiques représentatives (coloration PAS) (à gauche, n = 6). Barres d'échelle, 100 µm. La quantification des lésions tubulaires basée sur la coloration PAS (à droite, n = 6). e Expression de l'ARNm de facteurs inflammatoires (MCP-1, TNF-α et IL-1β) dans les tissus rénaux de souris HIF-1α CTAD−/− injectées avec Lv-HK2 (n = 6). F. Immunohistochimie et population semi-quantitative de macrophages F4/80+ infiltrant les reins (n ​​= 6). Barres d'échelle, 100 µm. **valeur p < 0,01 par rapport à Lv-NC. Les données sont présentées sous forme de moyenne ± SEM de 6 souris. Lv-NC a servi de contrôle (test t).

La fonction de HK2 a également été étudiée dans les lésions rénales induites par l'UUO. Comme prévu, l'expression de KIM-1 a été diminuée dans les reins de souris UUO présentant une surexpression de HK2 (Fig. 6a, b). La coloration PAS a révélé une amélioration des lésions rénales (Fig. 6c). Pendant ce temps, les expressions d'ARNm de MCP-1, TNF-α et IL-1β étaient également régulées à la baisse dans les tissus corticaux rénaux de souris présentant une surexpression de HK2 (Fig. 6d). De plus, comme illustré sur la figure 6e, il y a eu une réduction considérable du nombre de macrophages infiltrants. Par conséquent, ces données ont révélé que la surexpression de HK2 pourrait prévenir les lésions rénales induites par l'I/R dans des conditions d'inactivation de HIF-1α CTAD.

une analyse qRT-PCR de l'expression de KIM-1 dans le rein UUO de souris HIF-1α CTAD−/− injectées avec Lv-HK2. Les niveaux relatifs ont été normalisés à la β-actine (n = 6). b. Des images représentatives de l'expression de KIM-1 dans les tissus rénaux ont été évaluées par immunohistochimie (n = 6). Barres d'échelle, 50 µm. c Modifications histologiques représentatives (coloration PAS) (à gauche, n = 6). Barres d'échelle, 100 µm. La quantification des lésions tubulaires basée sur la coloration PAS (à droite, n = 6). d Expression de l'ARNm de facteurs inflammatoires (MCP-1, TNF-α et IL-1β) dans les tissus rénaux UUO de souris HIF-1α CTAD−/− avec administration de Lv-HK2 (n = 6). e Immunohistochimie et population semi-quantitative de macrophages F4/80+ infiltrant les reins (n ​​= 6). Barres d'échelle, 50 µm. **valeur p < 0,01 par rapport à Lv-NC. Les données sont présentées sous forme de moyenne ± SEM de 6 souris. Lv-NC a servi de contrôle (test t).

Ensuite, le mécanisme de la lésion rénale hypoxique induite par le déficit en HK2 a été étudié plus en détail dans des conditions d'inactivation de HIF-1α CTAD. Comme HK2 est une enzyme glycolytique cruciale dans le métabolisme énergétique, nous avons d'abord détecté les métabolites glycolytiques importants. Fait intéressant, nous avons constaté qu'il n'y avait aucune différence dans les niveaux de lactate et de pyruvate entre les deux groupes (Fig. S4 supplémentaire). Une étude récente a révélé que HK2 fonctionne comme un régulateur clé en reliant le métabolisme et l'autophagie. Par conséquent, nous avons proposé que des lésions rénales hypoxiques graves induites par une déficience en HK2 pourraient être associées à une mitophagie défectueuse. Fait intéressant, une diminution significative de l'expression de LC3-II a été observée dans le cortex rénal des souris HIF-1α CTAD−/− avec I/RI (Fig. 7a et Fig. S5a supplémentaire) et UUO (Fig. 7b et Fig. S5b supplémentaire). ), ce qui était cohérent avec l'augmentation de l'expression de p62, qui est un marqueur de mitophagie altérée. Pendant ce temps, l'inactivation de HIF-1α CTAD a induit des niveaux réduits d'autophagosomes et d'autolysosomes dans les TEC par rapport au groupe WT, ainsi que le nombre d'autophagosomes/autolysosomes renfermant des mitochondries, selon l'analyse TEM du cortex rénal de souris avec I/RI (Fig. 7c) et UUO (Fig. 7d). En parallèle, la réduction de l'expression de la sous-unité I du cytochrome C oxydase (Fig. 7e, f) et de l'activité enzymatique du complexe I de la chaîne respiratoire mitochondriale a été observée (Fig. S6 supplémentaire). Ensuite, à l'aide de vecteurs lentivirus, l'expression de HK2 a été stimulée pour déterminer le rôle potentiel de HK2 dans la régulation de la mitophagie. Fait intéressant, une diminution remarquable de l'expression de LC3-II et une augmentation de l'expression de p62 ont été atténuées dans le cortex rénal soumis au Lv-HK2 (Fig. S7 supplémentaire). Comme prévu, les changements de mitophagie ont également été confirmés par TEM, comme le montre la Fig. 7g, h.

a, b Analyse Western blot de l'expression de LC3 et p62 dans le rein avec I/RI ou UUO (n = 6). c, d Images TEM représentatives des mitochondries dans les tubules rénaux de souris avec I/RI ou UUO (n = 6). Barres d'échelle, 1 µm. e, f Analyse immunohistochimique de l'expression de la sous-unité I du cytochrome c oxydase (MT-CO1) dans des coupes de rein (n = 6). Barres d'échelle, 50 µm. g, h Images TEM représentatives des mitochondries dans les tubules rénaux de souris HIF-1α CTAD KO avec I/RI ou UUO après administration de Lv-HK2 (n = 6). Barres d'échelle, 1 µm. i, j Images BNIP3 représentatives des mitochondries dans les tubules rénaux de souris avec I/RI ou UUO (n = 6). Barres d'échelle, 50 µm. k, l Images PINK1 représentatives des mitochondries dans les tubules rénaux de souris avec I/RI ou UUO (n = 6). Barres d'échelle, 50 µm pour I/RI ; 100 µm pour UUO. Le groupe WT ou Lv-NC a servi de témoin.

Suite à cela, le mécanisme exact de la mitophagie médiée par HK2 a été exploré. Il est bien connu que la mitophagie est principalement réalisée par les voies d'initiation dépendantes de l'ubiquitine (Ub) (PINK1/parkine) ou indépendantes de l'Ub (HIF-1/BNIP3). Par conséquent, les deux voies ont été détectées dans notre étude. Fait intéressant, nous avons constaté que le niveau de BNIP3, une cible directe en aval de HIF-1α, n'était pas affecté lorsque le HIF-1α CTAD était knock-out (Fig. 7i, j). Cependant, l'expression de PINK1 était significativement diminuée dans les reins des souris HIF-1α CTAD−/− avec I/RI (Fig. 7k) et UUO (Fig. 7l). Pendant ce temps, les niveaux de PINK1 et BNIP3 dans les mitochondries ont également été examinés. De manière constante, le niveau de PINK1 a diminué de manière significative dans les mitochondries isolées des reins de souris HIF-1α CTAD - / - avec I / RI et UUO, alors que le niveau de BNIP3 n'a pas été affecté (Fig. S8 supplémentaire). De plus, pour déterminer que PINK1 était régulé par HK2, PINK1 a été détecté lorsque HK2 était surexprimé. Fait intéressant, une augmentation significative de l'expression de PINK1 a été observée (Fig. S9 supplémentaire). Collectivement, ces données ont indiqué que l'inhibition de la mitophagie induite par le déficit en HK2 favorise les lésions induites par l'hypoxie dans les TEC.

L'urolithine A (UA), un activateur spécifique de la mitophagie dont il a été prouvé qu'il induisait l'amélioration de la santé mitochondriale en stimulant la mitophagie chez l'homme [15], a été utilisé pour activer la mitophagie chez les souris HIF-1α CTAD−/− avec I/RI pour confirmer les effets fonctionnels de la mitophagie sur les lésions rénales induites par l'hypoxie in vivo. Premièrement, l'activation réussie de la mitophagie dans les cellules tubulaires a été confirmée (Fig. S10 supplémentaire). Nous avons constaté que les souris ayant reçu de l'UA avaient des niveaux réduits de SCr et de BUN (Fig. 8a). Conformément à l'effet protecteur rénal, la diminution de l'expression de KIM-1 a également été observée (Fig. 8b). Pendant ce temps, comme illustré sur la figure 8c, la nécrose et le détachement des tubules, l'accumulation de débris cellulaires et la formation de cylindres ont été nettement atténués dans les lésions rénales induites par l'I / R avec le traitement UA. De plus, l'expression des ARNm de cytokines inflammatoires (ARNm de TNF-α, IL-1β et MCP-1) était également régulée à la baisse chez cette souris (Fig. 8d). De manière concomitante, une infiltration réduite de macrophages a été observée dans les reins blessés traités par UA (Fig. 8e). Ces données ont indiqué que l'activation de la mitophagie prévient les lésions rénales induites par l'hypoxie dans les conditions d'inactivation de HIF-1α CTAD.

a Niveaux de SCr et BUN chez des souris HIF-1α CTAD−/− soumises à 35 min d'I/RI avec administration d'UA (n = 6). b Analyse qRT-PCR de l'expression de KIM-1. Les niveaux relatifs ont été normalisés à la β-actine (n = 6). c Modifications histologiques représentatives (coloration PAS) (à gauche, n = 6). Barres d'échelle, 100 µm. La quantification des lésions tubulaires basée sur la coloration PAS (à droite, n = 6). d Expression de l'ARNm de facteurs inflammatoires (MCP-1, TNF-α et IL-1β) dans les tissus rénaux de souris HIF-1α CTAD−/− traitées avec UA (n = 6). e Immunohistochimie et population semi-quantitative de macrophages F4/80+ infiltrant les reins (n ​​= 6). Barres d'échelle, 100 µm. **valeur p < 0,01 par rapport au véhicule. Les données sont présentées sous forme de moyenne ± SEM de 6 souris. Le véhicule a servi de témoin (test t).

Bien que HIF-1, un facteur de transcription maître pour les adaptations cellulaires à l'hypoxie, joue un rôle essentiel dans la protection contre les maladies rénales induites par l'hypoxie [16], les effets précis de HIF-1α CTAD sur les maladies rénales hypoxiques restent flous. Dans cette étude, nous avons d'abord démontré que HIF-1α CTAD pouvait exercer un rôle protecteur contre les maladies rénales induites par l'hypoxie via la régulation transcriptionnelle de HK2. De plus, nous avons découvert que la voie HIF-1α CTAD-HK2 prévient les lésions rénales induites par l'hypoxie en maintenant la mitophagie médiée par PINK1, un mécanisme jusque-là non reconnu pour les réponses du rein à l'hypoxie.

L'hypoxie est l'un des instigateurs les plus importants du développement des maladies rénales et est étroitement associée à l'inflammation rénale et à la fibrose [1, 17]. HIF-1 a été activé rapidement en réponse à l'hypoxie et a déterminé les résultats des lésions rénales induites par l'hypoxie [18]. Plus intéressant, il a été démontré que l'activation de la signalisation HIF-1 tubulaire par une approche génétique ou des stratégies pharmacologiques pouvait apporter une rénoprotection [19,20,21]. Cependant, de plus en plus d'études ont montré que l'activation de HIF-1 présente des effets pléiotropes sur les lésions rénales et les répare en régulant directement les gènes cibles [22]. Pendant ce temps, notre étude antérieure a également révélé les effets biphasiques du HIF-1 sur les maladies rénales [23]. Récemment, il a été reconnu qu'il existe une hétérogénéité physiologique dans la voie de signalisation rein-hypoxie, ce qui pourrait fournir une nouvelle compréhension des maladies rénales [24]. Par conséquent, élucider la pathogenèse exacte du HIF dans les maladies rénales hypoxiques est extrêmement important.

Dans une étude antérieure, Chowdhury et al. [25] ont suggéré que l'activation de différents domaines de HIF-1α pourrait réguler finement les fonctions de HIF-1. Des études de biologie structurale ont démontré que HIF-1α possède deux domaines d'activation transcriptionnelle (NTAD et CTAD), qui pourraient transcrire des gènes différents, remplissant leurs propres fonctions [6, 7, 26]. Récemment, Ito et al. [27] ont indiqué que l'activation du HIF-1α NTAD induite par l'inhibiteur de la PDH protège les reins de l'ischémie par la régulation à la hausse du stockage du glycogène. Cependant, les fonctions de HIF-1α CTAD dans les maladies rénales restent incertaines. Dans la présente étude, les fonctions de HIF-1α CTAD dans les maladies rénales induites par l'hypoxie ont été étudiées en utilisant les souris HIF-1α CTAD−/−. Fait intéressant, HIF-1α CTAD−/− s'est avéré exacerber les lésions rénales chez les souris modèles de lésions rénales induites par I/R et UUO. En outre, les lésions rénales induites par l'hypoxie ont été significativement atténuées par la surexpression de HIF-1α CTAD. Par conséquent, l'activation du HIF-1α CTAD est l'une des réponses cruciales du rein à l'hypoxie, et le HIF-1α CTAD tubulaire joue un rôle central dans la prévention des lésions rénales induites par l'hypoxie.

Il a été précédemment rapporté par Baumann et al. [14] que HIF-1α NTAD pourrait réguler transcriptionnellement COL1A2 en se liant à un élément fonctionnel sensible à l'hypoxie dans son promoteur pour favoriser la glomérulosclérose. Pendant ce temps, des preuves convaincantes ont révélé que l'inactivation de HIF CTAD n'a aucun impact sur la fonction d'activation transcriptionnelle dépendante de HIF [28]. Par conséquent, nous émettons l'hypothèse que HIF-1 CTAD joue un rôle rénoprotecteur dans les maladies rénales en transcrivant des gènes cibles spécifiques. Fait intéressant, il a été observé que HK2 était significativement diminué chez les souris HIF-1α CTAD−/− par séquençage de l'ARNm. De plus, nous avons découvert que HIF-1α CTAD régule la réponse transcriptionnelle de HK2, qui joue un rôle vital dans la prévention des lésions rénales induites par l'hypoxie. En rapport avec nos résultats, Chan et al. [7] ont également identifié que HK2 est principalement régulé par HIF-1α CTAD dans les cellules tumorales hypoxiques. Par conséquent, la voie HIF-1α CTAD-HK2 pourrait être la réponse moléculaire critique du rein à une lésion hypoxique. À notre connaissance, il s'agit de la première étude à caractériser le rôle de HIF-1α CTAD dans le contexte d'une lésion rénale induite par l'hypoxie, enrichissant la compréhension des réponses du rein à l'hypoxie.

Alors, quel est le mécanisme exact sous-jacent à l'aggravation de l'atteinte rénale causée par le déficit en HK2 ? Considérant que HK2 est l'enzyme essentielle limitant la vitesse de la voie glycolytique, qui joue un rôle extrêmement important dans le métabolisme énergétique [29], nous avons émis l'hypothèse que la reprogrammation du métabolisme énergétique médiée par HK2 pourrait être le mécanisme précis potentiel sous-jacent à HIF-1α CTAD. rénoprotection. Étonnamment, nous avons constaté que le déficit en HK2 résultant de l'inactivation de HIF-1α CTAD ne provoquait aucun changement dans le métabolisme énergétique. Des études antérieures ont suggéré que HK2 intégrait la glycolyse et l'autophagie pour conférer une protection cellulaire dans les cardiomyocytes [30], et il est nécessaire pour le recrutement de la parkine dans les mitochondries dépolarisées [31]. Par conséquent, nous avons émis l'hypothèse que la rénoprotection induite par HIF-1α CTAD pourrait être médiée par la mitophagie, qui est cruciale pour le maintien de l'homéostasie rénale [32]. En effet, une réduction significative de la mitophagie a été observée chez les souris HIF-1α CTAD−/−. Pendant ce temps, la découverte a été confirmée par l'administration d'un activateur de mitophagie spécifique. Ceux-ci étaient cohérents avec les résultats d'études antérieures selon lesquelles l'activation de la mitophagie prévient les lésions ischémiques/hypoxiques rénales [33, 34]. Fait intéressant, Tan et al. [35] ont également découvert que HK2 pouvait fonctionner comme un capteur pour déclencher la mitophagie dans un modèle d'I/R myocardique aigu. Ainsi, il est démontré que l'inhibition de la mitophagie médiée par le déficit en HK2 est le mécanisme critique dans les lésions rénales induites par le knock-out HIF-1α CTAD.

En particulier, HK2 est de plus en plus reconnu comme un composant d'un lien de signalisation de survie en plus de son rôle fondamental dans le métabolisme énergétique, en particulier la glycolyse [36]. Ici, nous avons constaté que la mitophagie médiée par HK2 atténue les lésions rénales induites par l'hypoxie, ce qui implique que HK2 confère une protection cellulaire au cours de la physiopathologie des maladies rénales hypoxiques en intégrant le métabolisme énergétique et la mitophagie. Cependant, on ne sait toujours pas ce qui déclenche le basculement entre les effets glycolytiques et autophagiques de HK2. Certaines preuves ont révélé que HK2 mort par kinase dans les cellules endogènes appauvries en HK2 stimule l'autophagie en présence de glucose [37], indiquant que l'effet autophagique de HK2 est supprimé par son activité catalytique. Cependant, des recherches supplémentaires sont nécessaires pour déterminer son mécanisme exact.

Collectivement, malgré les efforts considérables de nombreux chercheurs et médecins dévoués, les réponses moléculaires précises du HIF-1 à l'hypoxie dans les maladies rénales restent à élucider. Dans cette étude, nous avons démontré que le CTAD HIF-1α tubulaire prévient les lésions rénales induites par l'hypoxie en régulant à la hausse la transcription de HK2, ce qui améliore la mitophagie et joue par la suite un rôle crucial dans la rénoprotection (Fig. 9). Ces résultats suggèrent une nouvelle compréhension des mécanismes moléculaires du rein à l'hypoxie, enrichissant la signalisation de la réponse à l'hypoxie et pourraient fournir une cible d'intervention passionnante pour les lésions rénales hypoxiques.

Lors d'une lésion rénale induite par l'hypoxie, le CTAD HIF-1α tubulaire prévient les lésions rénales en activant la mitophagie médiée par HK2.

Les auteurs confirment que les données à l'appui des conclusions de l'article sont présentées dans l'article et son matériel supplémentaire. Des données supplémentaires liées à cet article sont disponibles auprès de l'auteur correspondant.

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Cette étude a été soutenue par des subventions de la Fondation nationale des sciences naturelles de Chine (82000648); le programme clé de la Fondation nationale des sciences naturelles de Chine (82030024 et 82230022); la Fondation des sciences naturelles de la province du Jiangsu (BK20200363), la Fondation exceptionnelle pour la culture de la jeunesse de l'Université du Sud-Est (2021ZDYYYQPY07), le talent innovant et entrepreneurial (docteur) de la province du Jiangsu, la Fondation des sciences naturelles de la province du Shandong (ZR2022MH161) et la médecine clinique + X Projet d'Hôpital Affilié de l'Université de Qingdao (3390). Les auteurs correspondants confirment avoir la responsabilité finale de la décision de soumettre pour publication.

Institut de néphrologie, Hôpital Zhong Da, École de médecine de l'Université du Sud-Est, Nanjing, Jiangsu, Chine

Zuo-Lin Li, Yue Zhang, Yi-Lin Zhang, Wei-Jie Ni, Tao-Tao Tang, Gui-Hua Wang, Bin Wang, Lin-Li Lv, Qiu-Li Wu, Yi Wen et Bi-Cheng Liu

Département de néphrologie, Hôpital affilié de l'Université de Qingdao, Qingdao, Shandong, Chine

Lin Ding & Rui-Xia Ma

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ZLL, RXM et BCL ont conçu l'étude, réalisé des expériences, analysé des données et rédigé et édité l'article ; LD, YZ, YLZ, WJN et TTT ont mené des expériences et analysé les données ; et GHW, BW, LLL, QLW et YW ont analysé les données, réalisé les chiffres et édité l'article ; tous les auteurs ont approuvé la version finale de l'article.

Correspondance à Rui-Xia Ma ou Bi-Cheng Liu.

Les auteurs ne déclarent aucun intérêt concurrent.

Note de l'éditeur Springer Nature reste neutre en ce qui concerne les revendications juridictionnelles dans les cartes publiées et les affiliations institutionnelles.

Edité par le professeur Boris Zhivotovsky

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Réimpressions et autorisations

Li, ZL., Ding, L., Ma, RX. et coll. L'activation du domaine de transactivation C-terminal de HIF-1α protège contre les lésions rénales induites par l'hypoxie par la mitophagie médiée par l'hexokinase 2. Mort cellulaire Dis 14, 339 (2023). https://doi.org/10.1038/s41419-023-05854-5

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Reçu : 18 décembre 2022

Révisé : 07 avril 2023

Accepté : 05 mai 2023

Publié: 24 mai 2023

DOI : https://doi.org/10.1038/s41419-023-05854-5

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